Ekspresi Heterolog Lipase B Candida antarctica pada Aspergillus niger Menggunakan Penyuntingan Multigen yang dimediasi CRISPR/Cas9

ABSTRAK
Aspergillus niger , jamur berfilamen, dikenal sebagai pabrik sel karena kemampuannya untuk menghasilkan sejumlah besar asam organik dan enzim industri. Lipase B dari Candida antarctica (CALB) adalah salah satu lipase yang paling banyak digunakan dalam aplikasi industri, termasuk pengolahan minyak, pembuatan kertas, makanan, farmasi, dan produk perawatan pribadi. Dalam penelitian ini, teknik CRISPR/Cas9 digunakan untuk melumpuhkan gen pyrG dan kusA di A. niger . Gen CALB diintegrasikan ke dalam lokus gen protein produksi tinggi, seperti glaA dan amyA , untuk membangun strain rekayasa produksi CALB multi-salinan. Selain itu, gen pepA , aglU , dan bglA dihapus, yang meminimalkan tingkat latar belakang protein yang disekresikan di A. niger dan meningkatkan produksi CALB. Setelah dua putaran penyuntingan gen, A. niger dengan CALB multi-salinan dibuat, dan CCTCC 206047.09 A. niger hasil rekayasa dengan hasil CALB yang tinggi diisolasi. Setelah 120 jam fermentasi cair, aktivitas lipase mencapai 17,84 U/mL dan hasil protein mencapai 10,21 mg/mL. Singkatnya, galur A. niger hasil rekayasa dengan aktivitas lipase tinggi berhasil diisolasi dengan menggunakan sistem CRISPR/Cas9 untuk mengintegrasikan CALB ke dalam lokus berekspresi tinggi, sementara secara bersamaan melumpuhkan gen protein inang yang berekspresi tinggi. Hasil ini memberikan strategi efektif untuk ekspresi tinggi enzim heterolog dan homolog dalam A. niger .